質粒中量提取試劑盒，Plasmid Midi Kit(25)使用說明書
上海遠慕生物專業供應美國Omega旗下產品：DNA、RNA回收純化相關溶液，基因組DNA相關溶液，RNA相關溶液，質粒相關溶液，酸洗玻璃珠，破壁酶Lyticase，植物組織直接PCR試劑盒，動物組織直接PCR試劑盒，石蠟組織（FFPE）直接PCR試劑盒，磁珠mRNA組織直接抽提試劑盒，質粒大量提取試劑盒，其他系列等，本司代理多款進口品牌及國產品牌供您選擇，產品包含：ELISA試劑盒，動物血清，質粒載體，標準品對照品，培養基，抗體，化學試劑，生化試劑，染色液，實驗耗材，其他實驗試劑等，品種齊全，型號廣，價格實惠，咨詢訂購！
名稱：質粒中量提取試劑盒
品牌：Omega
供應商：上海遠慕
英文名/型號：Plasmid Midi Kit(2)
英文名/型號：Plasmid Midi Kit(10)
英文名/型號：Plasmid Midi Kit(25)
英文名/型號：Plasmid Midi Kit(100)
用途：從15-50ml細菌培養液中純化200-250ug高純度的質粒DNA
Plasmid Midi Kit(25)特性與優點：
無內毒素－內毒素含量低于0.1EU/µg
方便－菌裂解液中去除雜質無需離心操作
安全－無酚lvfang抽提
可靠－操作簡單
Plasmid Midi Kit(25)操作步驟：
提示：將RNase A全部加入溶液P1中，混勻，使用后置于2-8℃保存。
1.取過夜培養菌40-60ml（zui大不超過90 ml）菌液，裝入50ml離心管中，4,500~6,000 x g于4℃離心5 min沉淀菌體（也可12,000 x g離心2分鐘），*棄除上清。
2.加入2.5 ml 溶液P1，充分混懸震蕩菌體沉淀，使其*分散開，至無絮塊存在。室溫放置3~5 min。 如果有未*混勻的菌塊，會影響裂解，導致提取量和純度偏低。
3.加入2.5 ml 溶液P2，輕輕顛倒離心管6~8次，室溫放置5 min，使細菌*裂解，溶液透明。 溫和地混合，不要劇烈震蕩，以免基因組DNA剪切斷裂！所用時不應超過5分鐘！以免質粒受到破壞。此時菌液應變得清亮粘稠，如果菌體少，很快清亮粘稠后就可以做下一步，不是一定要準確的5分鐘。如果未變得清亮，可能由于菌體過多，裂解不*，應減少菌體量。
4.加2.5 ml溶液PⅢ，立即顛倒離心管6~8次，充分混勻，至白色絮狀物產生。上述裂解液于4℃ 12,000~16,000 x g離心10~15 min，小心吸出上清，移入新的50 ml離心管中。 加入溶液PⅢ后應該立即混勻，以免產生SDS的局部沉淀。 注意： 使用異丙醇沉淀，蛋白雜質和鹽離子共沉淀較少，可能看不到明顯的較大團塊沉淀，但是質粒還是可以*沉淀下來，不影響實際的質粒產量。如果你習慣看見較大的沉淀團塊操作，可以選擇2倍體積的無水乙醇沉淀。
5.加入5 ml 異丙醇，顛倒離心管，充分混勻。
6.于4℃ 12,000~16,000 x g離心10 min，小心棄去上清，倒置于吸水紙上輕輕瀝干殘余液體，加入3-5ml 70%乙醇漂洗一遍，zui高速離心5分鐘，棄上清，晾干沉淀。 DNA沉淀如果干燥過頭，DNA將無法*溶解，但是如果乙醇沒有晾干揮發干凈，殘留太多，也會造成DNA無法*溶解。 注意：異丙醇離心沉淀后，質粒純度很高吸附在管底和側壁可能看不見沉淀，但是不影響產量，后續步驟仔細吹打管底和沉淀所在的側壁涮洗溶解質粒。
7.加入0.7 ml 溶液P1*溶解沉淀團塊，注意附著在管底和側壁上的質粒沉淀雖然可能看不見，也要吹打管底和沉淀所在的側壁涮洗下來（大質粒可用寬口吸管輕輕吹打輔助溶解）。然后將質粒溶液轉入1個新的1.5 ml離心管中。 可選步驟（一般不需要）：如果菌株RNA豐富有微量RNA殘留，可在此步驟后將質粒溶液 60℃孵育15 min消化RNA。
8.加入55μl雜質清除液A，顛倒充分混勻后加入約0.1體積(約80μl)冰預冷的內毒素清除劑，顛倒旋轉7-10次（30秒左右）充分混勻，冰浴或者冰上放置>=5分鐘，中間偶爾顛倒混勻幾次。 內毒素清除劑加入上清后，上清會變得渾濁，但是冰浴后應恢復清亮。 注意：如果不需要去內毒素用于轉染，可在此步驟只加入55μl雜質清除液A，充分混勻后冰上放置5分鐘，離心后小心取上清轉入一個新管，直接接步驟11。
9.42℃水浴，溶液又會變為渾濁，顛倒混勻后42℃溫育5分鐘。
10.室溫14,000 x g離心5 min分相（溫度低時，內毒素清除劑無法分相，因此必須 至少20℃以上室溫離心或者保證冬季轉頭溫度20℃以上）。上層水相含DNA，下層藍色油狀相含內毒素和其它雜質。將含DNA的上層水相轉移到新管（注意不要吸到藍色油狀層，里面含內毒素等雜質），棄油狀層。溶液必須分為上下兩相，否則應重復步驟9-10。
11.將上一步所得上層水相中加入等體積雜質清除液B（約750μl），輕柔混勻，4℃ 14,000 x g離心10 min，棄上清（注意不要丟失DNA），輕輕加入1 ml 70%乙醇洗滌，離心棄上清，共兩次，室溫倒置晾干5~10 min使乙醇*揮發。
12.加適量TE或者純水（50~100μl）溶解沉淀（可在37℃水浴中振蕩以輔助溶解）。 要注意很多質粒DNA可能附著在離心管側壁上，即使看不見，也應該充分吹打側壁溶解回收質粒DNA。 zui后沉淀可以根據需要選擇任意小體積溶解，這樣可以得到很高濃度的轉染級質粒DNA（高達5-10μg/μl）。如果有需要，客戶也可以選擇更大體積溶解。
溫馨提示：以上相關說明請以產品實際說明書為準！
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標簽：質粒中量提取試劑盒 Plasmid Midi Kit(25) 中量質粒提取試劑盒 質粒提取試劑盒
